Surveillance microbiologique en salle blanche

Abb.1 : Compteur de particules en suspension dans l'air HHP6+

Fig. 2 : Petri-Light avec stylo

Les exigences en fabrication pharmaceutique sont de plus en plus strictes, de plus en plus de processus de fabrication doivent se dérouler dans des conditions particulières, hygiéniques et impeccables. Le refus d'utiliser des conservateurs impose également des conditions de production absolument propres. Pour vérifier la charge de l'air en micro-organismes, des collecteurs de micro-organismes de l'air sont utilisés. La contribution suivante donne un aperçu des enjeux et des détails d'application des collecteurs de micro-organismes de l'air en pratique.

Des appareils spéciaux ont été développés pour vérifier la concentration de micro-organismes dans l'air, permettant par leur conception particulière de collecter des particules jusqu'à 1 μm. La méthode adoptée pour la collecte de micro-organismes dans l'air est le principe Anderson. L'air est aspiré à une vitesse déterminée et les particules sont projetées directement sur une surface d'agar, qui sert également de milieu nutritif. La collision directe des germes sur la boîte de Petri remplie d'agar est appelée le principe d'impaction. L'avantage de cette méthode est qu'aucune manipulation de filtre n'est nécessaire. La prise d'échantillons est simplifiée et la contamination secondaire est pratiquement exclue.

Critères de sélection des collecteurs de micro-organismes de l'air conformes à l'application

Les collecteurs de micro-organismes de l'air doivent être pratiques et faciles à désinfecter. La pratique exige une calibration périodique. Lors de l'achat d'un appareil, il est donc impératif de vérifier si cela peut être effectué sur place, car dans le domaine pharmaceutique, les appareils ne doivent pas toujours quitter le site. Pour le contrôle et la validation des salles blanches, des isolateurs, des RABS, des laboratoires microbiologiques, des installations de biotechnologie et de production de vaccins, des salles d'opération, des hôpitaux et des cliniques, le DUO SAS Super 360 peut également être utilisé si le gain de temps est un critère important. Cet appareil fonctionne simultanément avec 2 récipients de collecte et à une vitesse de 180 L/min.

Le SAS Super Pinocchio II est conçu pour la vérification microbiologique de l'air et d'autres gaz comprimés dans l'industrie pharmaceutique, alimentaire ainsi que dans d'autres secteurs critiques. Le gaz comprimé est directement raccordé à l'appareil. La durée de prélèvement est réglée de manière à atteindre le volume total requis (par exemple 1000 litres).

La prise d'échantillons d'air et leur analyse en pratique

La prise d'échantillons :

- Placer l'appareil sur une surface stable
- Ouvrir le couvercle à trous (avec le couvercle anti-poussière en place)
- Placer la boîte de Petri fermée, remplie d'agar, sur les supports de boîtes de Petri
- Retirer le couvercle de la boîte de Petri
- Refermer le couvercle à trous
- Positionner la tête de collecte en fonction du flux d'air (la tête de collecte peut être orientée dans n'importe quel angle, de horizontal à vertical)
- Retirer le couvercle anti-poussière et commencer la prise d'échantillon

L'incubation :

La boîte de Petri est maintenant prête pour l'incubation. Selon les exigences et la question posée, différents milieux nutritifs peuvent être utilisés. Il existe différents milieux pour levures, moisissures et bactéries, qui diffèrent par leur composition et leur pH. Le milieu DG 18 agar est particulièrement recommandé, car c'est un milieu nutritif spécialisé pour les micro-organismes de l'air. Le choix du type de plaque et du milieu est déterminant pour la conformité aux principales pharmacopées, normes ISO et cGMP. En général, les bactéries environnementales sont incubées pendant 24 à 68 heures à 30 °C, et les levures et moisissures pendant au moins 7 jours à 25 °C.

Lors de la manipulation des milieux, il faut respecter les instructions du fabricant. Tout comme pour les plaques de contact, les boîtes de Petri contenant des milieux spécifiques pour le contrôle microbiologique de l'air et des surfaces sont fournies. Grâce à leur emballage stérile triple, les plaques peuvent être transportées dans des environnements à faible contamination ou dans des zones stériles (l'une des trois couches d'emballage extérieur étant retirée avant d'entrer dans une salle blanche).

Les plaques de contact présentent également l'avantage que le même type de plaque peut être utilisé pour les contrôles de l'air et des surfaces. À l'inverse, les boîtes de Petri de 90 mm offrent une surface plus grande pour le comptage des colonies et sont particulièrement utiles lorsque le nombre attendu sur la « plaque » dépasse 100 unités formant colonie.

Les plaques de contact et les boîtes de Petri de VWR sont disponibles avec des neutralisants (Tween, lécithine, histidine, thiosulfate) et des neutralisants antibiotiques (pénicillinase), afin de ne pas sous-estimer le nombre de germes.

VWR propose également des collecteurs de particules pour le contrôle quotidien selon ISO 14644/1. Ceux-ci sont utilisés pour la vérification des tailles de particules de 0,5 μm et 5 μm. Les principales différences entre les différents modèles résident dans le nombre de canaux et la taille des particules pouvant être comptabilisées. Une station d'accueil maintient l'appareil en position verticale lors de son utilisation, de son stockage ou de la charge de la batterie. La station d'accueil comporte également des connexions de données et d'alimentation. L'écran LCD et le clavier à 7 touches à l'avant de l'appareil servent d'interface utilisateur. L'appareil conserve les données collectées dans sa mémoire flash. Ces données sont conservées même lorsque l'appareil est éteint. Les données peuvent être affichées sur l'écran, transférées sur un PC ou un ordinateur portable via un câble USB, sauvegardées sur une clé USB ou transférées via une connexion Ethernet. Aucun logiciel spécifique n'est nécessaire.