Monitoring mikrobiologiczne w pomieszczeniach czystych

Abb.1: Licznik cząstek unoszących się w powietrzu HHP6+

Rys. 2: Petri-Light z długopisem

Wymagania w produkcji farmaceutycznej podlegają coraz bardziej rygorystycznym przepisom, coraz więcej procesów produkcyjnych musi odbywać się w specjalnych, higienicznych warunkach. Również rezygnacja z konserwantów wymaga absolutnie czystych warunków produkcyjnych. Do kontroli obciążenia powietrza mikroorganizmami służą zbieracze mikroorganizmów z powietrza. Poniższy artykuł daje wgląd w tło i szczegóły zastosowania zbieraczy mikroorganizmów w praktyce.

Do sprawdzania stężenia mikroorganizmów w powietrzu opracowano specjalne urządzenia, które dzięki swojej konstrukcji umożliwiają zbieranie części do 1 μm. Za metodę zbierania mikroorganizmów z powietrza przyjęto zasadę Andersona. Polega ona na zasysaniu powietrza z określoną prędkością i bezpośrednim wyrzucaniu cząstek na powierzchnię agaru, która jednocześnie służy jako podłoże odżywcze. Bezpośredni impakt mikroorganizmów na agarową płytkę Petriego nazywa się zasadą impakcji. Ma to tę zaletę, że nie są potrzebne manipulacje filtrami. Pobieranie próbek jest uproszczone, a praktycznie wykluczone jest zanieczyszczenie wtórne.

Kryteria wyboru odpowiednich dla zastosowania zbieraczy mikroorganizmów z powietrza

Zbieracze mikroorganizmów z powietrza powinny być poręczne i łatwe do dezynfekcji. Praktyka wymaga okresowej kalibracji. Przy zakupie urządzenia koniecznie należy sprawdzić, czy jest to możliwe również na miejscu, ponieważ urządzenia w branży farmaceutycznej nie zawsze mogą opuszczać teren zakładu. Do kontroli i walidacji czystych pomieszczeń, izolatorów, RABS, laboratoriów mikrobiologicznych, biotechnologii i produkcji szczepionek, sal operacyjnych, szpitali i klinik można również użyć DUO SAS Super 360, jeśli ważny jest oszczędność czasu. Ten zbieracz mikroorganizmów pracuje jednocześnie z dwoma zbiornikami i z prędkością 180 L/min.

SAS Super Pinocchio II jest przeznaczony do mikrobiologicznej kontroli powietrza i innych gazów pod ciśnieniem w przemyśle farmaceutycznym i spożywczym oraz w innych krytycznych obszarach. Gaz pod ciśnieniem jest podłączany bezpośrednio do urządzenia. Czas pobierania próbki jest ustawiany tak, aby osiągnąć wymaganą objętość (np. 1000 litrów).

Praktyka pobierania i analizy próbek powietrza

Pobieranie próbki:

- Umieścić urządzenie na stabilnej powierzchni
- Otworzyć pokrywę z otworem (z założoną osłoną przeciwkurzową)
- Umieścić zamkniętą, wypełnioną agarem standardową płytkę Petriego na uchwytach
- Zdjąć pokrywę płytki Petriego
- Zamknąć pokrywę z otworem
- Ustawić głowicę zbierającą zgodnie z kierunkiem przepływu powietrza (głowica może być ustawiona pod dowolnym kątem od poziomego do pionowego przepływu powietrza)
- Zdjąć osłonę przeciwkurzową i rozpocząć pobieranie próbki

Hodowla:

Płytka Petriego jest teraz gotowa do hodowli. W zależności od wymagań i pytań badawczych można używać różnych podłoży odżywczych. Istnieją różne media dla drożdży, pleśni i bakterii, różniące się składem i pH. Szczególnie polecany jest agar DG 18, specjalne podłoże odżywcze dla mikroorganizmów powietrza. Wybór rodzaju płytki i medium jest kluczowy dla zgodności z najważniejszymi farmakopeami, normami ISO i cGMP. Zazwyczaj bakterie środowiskowe inkubuje się przez 24 do 68 godzin w temperaturze 30°C, a drożdże i pleśnie przez co najmniej 7 dni w temperaturze 25°C.

Podczas obsługi mediów należy przestrzegać instrukcji producenta. Podobnie jak w przypadku płyt z wymazami, płytki Petriego z specjalnymi mediami są dostarczane do kontroli mikrobiologicznej powietrza i powierzchni. Dzięki sterylnej potrójnej opakowaniu płytki można transportować w środowiskach o niskim poziomie zanieczyszczeń lub w strefach sterylnych (jedna z trzech warstw zewnętrznego opakowania jest usuwana przed wejściem do pomieszczenia czystego).

W przypadku płyt z wymazami istnieje dodatkowa zaleta, że można je używać zarówno do kontroli powietrza, jak i powierzchni. Z kolei 90-mm płytki Petriego zapewniają większą powierzchnię do liczenia kolonii i są szczególnie przydatne, gdy oczekiwana liczba jednostek tworzących kolonie na „płytce” przekracza 100.

Płytki wymazowe i płytki Petriego firmy VWR są dostępne z neutralizatorami (Tween, lecytyna, histydyna, tiosiarczan) oraz z neutralizatorami antybiotyków (penicylinaza), aby liczba mikroorganizmów nie była zaniżona.

VWR oferuje również codzienne zbieracze cząstek do kontroli zgodnie z ISO 14644/1. Są one stosowane do badania cząstek o rozmiarze 0,5 μm i 5 μm. Różne modele różnią się głównie liczbą kanałów i rozmiarami cząstek, które można liczyć. Stacja dokująca utrzymuje urządzenie w pozycji pionowej podczas używania, przechowywania lub ładowania akumulatora. Stacja posiada również porty danych i zasilania. Wyświetlacz LCD i 7-przyciskowa klawiatura na przedniej stronie urządzenia służą jako interfejs użytkownika. Urządzenie przechowuje zebrane dane w pamięci flash. Dane pozostają zapisane po wyłączeniu urządzenia. Dane można wyświetlać na ekranie, przesyłać za pomocą kabla USB do komputera lub laptopa, zapisywać na pendrive lub przesyłać przez połączenie Ethernet. Nie jest wymagana specjalistyczna oprogramowanie.