Mikrobiologický monitoring v čistém prostoru

Obrázek 1: Přenosný počítač částic HHP6+

Obrázek 2: Petri-Light s perem

Požadavky na farmaceutickou výrobu jsou stále přísnější, stále více výrobních procesů musí probíhat za zvláštních, hygienicky nezávadných podmínek. Také záměrné vynechání konzervačních prostředků vyžaduje naprosto čisté výrobní podmínky. Pro kontrolu znečištění ovzduší mikroorganismy slouží vzduchové sběrače mikroorganismů. Následující příspěvek poskytuje přehled o pozadí a detailech použití vzduchových sběračů mikroorganismů v praxi.

Pro kontrolu koncentrace mikroorganismů ve vzduchu byly vyvinuty speciální přístroje, které díky svému zvláštnímu konstrukčnímu provedení umožňují sběr částic až do velikosti 1 μm. Jako metoda pro sběr vzdušných mikroorganismů se osvědčil princip Anderson. Při něm je vzduch nasáván určitou rychlostí a částice jsou přímo vystřikovány na agarový povrch, který zároveň slouží jako živné médium. Přímé dopadnutí mikroorganismů na agarovou Petriho misku naplněnou agarem se nazývá impakční princip. Tento má výhodu, že není nutná manipulace s filtry. Odběr vzorků je tak jednodušší a prakticky vylučuje sekundární kontaminaci.

Kritéria pro výběr vhodných vzduchových sběračů mikroorganismů

Vzduchové sběrače mikroorganismů by měly být kompaktní a snadno dezinfikovatelné. Praxe vyžaduje periodickou kalibraci. Při koupi zařízení je proto nutné zkontrolovat, zda je možné kalibraci provést i na místě, protože v farmaceutickém prostředí nemusejí zařízení opouštět areál. Pro kontrolu a validaci čistých prostor, izolátorů, RABS, mikrobiologických laboratoří, biotechnologických a vakcinačních zařízení, operačních sálů, nemocnic a klinik lze také použít DUO SAS Super 360, pokud je důležitá úspora času. Tento vzduchový sběrač pracuje současně se dvěma sběrnými nádobami a s rychlostí 180 L/min.

SAS Super Pinocchio II je určen pro mikrobiologickou kontrolu vzduchu a jiných tlakových plynů v farmaceutickém a potravinářském průmyslu a v dalších kritických oblastech. Tlakové plyny jsou připojeny přímo ke zařízení. Doba odběru vzorku je nastavena tak, aby bylo dosaženo požadovaného celkového objemu (například 1000 litrů).

Odběr a analýza vzorků vzduchu v praxi

Odběr vzorků:

- Umístit zařízení na stabilní podložku
- Otevřít víko s otvorem (s nasazeným ochranným krytem)
- Umístit uzavřenou Petriho misku naplněnou agarem na držáky Petriho misek
- Odstranit víko Petriho misky
- Zavřít víko s otvorem
- Umístit sběrní hlavu podle směru proudění vzduchu (sběrní hlava může být nastavena v libovolném úhlu od horizontálního po vertikální směr proudění vzduchu)
- Odstranit ochranný kryt a zahájit sběr vzorku

Kultura:

Petriho miska je nyní připravena ke kultivaci. V závislosti na požadavcích a otázkách lze použít různá živná média. Existují různé média pro kvasinky, plísně a bakterie, která se liší složením a pH. Zvláště doporučen je agar DG 18, speciální živné médium pro vzdušné mikroorganismy. Výběr typu desky a média je klíčový pro shodu s nejdůležitějšími farmakopejemi, normami ISO a cGMP. Obvykle se vzdušné bakterie inkubují 24 až 68 hodin při 30 °C a kvasinky a plísně alespoň 7 dní při 25 °C.

Při manipulaci s médii je nutné dodržovat pokyny výrobce médií. Stejně jako u tampónových desek jsou Petriho misky dodávány s speciálními médii pro mikrobiologickou kontrolu vzduchu a povrchů. Díky sterilní trojité obalové vrstvě lze desky dále přepravovat v prostředí s nízkou kontaminací nebo v sterilních prostorách (jedna z tří vnějších obalových vrstev je před vstupem do čistého prostoru odstraněna).

U tampónových desek je výhodou, že stejného typu desky lze použít jak pro kontrolu vzduchu, tak pro kontrolu povrchů. Naopak, 90mm Petriho misky nabízejí větší plochu pro počet kolonií a jsou zvláště užitečné, pokud očekávaný počet kolonií na „desce“ přesahuje 100 kolonií.

Tampónové desky a Petriho misky od VWR jsou dostupné s neutralizátory (Tween, Lecithin, Histidin, Thiosulfát) a s antibiotickými neutralizátory (Penicilináza), aby se zabránilo podcenění počtu mikroorganismů.

VWR nabízí pro každodenní kontrolu podle ISO 14644/1 také částicové sběrače. Ty se používají při kontrole velikosti částic 0,5 μm a 5 μm. Hlavní rozdíly mezi různými modely spočívají v počtu kanálů a velikostech částic, které lze počítat. Nabíječka drží zařízení ve svislé poloze během použití, skladování nebo nabíjení baterie. Nabíječka má také datové a napájecí připojení. LCD displej a sedmimístné tlačítko na přední straně zařízení slouží jako uživatelské rozhraní. Zařízení uchovává shromážděná data v paměti Flash. Data zůstanou zachována i při vypnutí zařízení. Data lze zobrazit na displeji,
přenést pomocí USB kabelu na PC nebo notebook, uložit na USB flash disk nebo přenést přes Ethernet. Není nutný žádný speciální software.