Monitoraggio microbiologico in ambiente sterile

Fig.1: Contatore di particelle in aria HHP6+

Fig. 2: Petri-Light con penna

Le esigenze nella produzione farmaceutica sono soggette a normative sempre più rigorose, sempre più processi di produzione devono svolgersi in condizioni particolari, igienicamente impeccabili. Anche il divieto di conservanti comporta condizioni di produzione assolutamente pure. Per verificare l'inquinamento dell'aria da parte di microrganismi si utilizzano raccoglitori di microbi dell'aria. Il seguente articolo offre una panoramica sui retroscena e sui dettagli applicativi dei raccoglitori di microbi dell'aria nella pratica.

Per controllare la concentrazione di microrganismi nell'aria sono stati sviluppati apparecchi specifici che, grazie alla loro particolare costruzione, consentono di raccogliere parti fino a 1 μm. Come metodo per la raccolta di microbi dell'aria si è affermato il principio Anderson. In questo metodo, l'aria viene aspirata a una determinata velocità e le particelle vengono proiettate direttamente su una superficie di agar, che funge anche da mezzo nutritivo. L'impatto diretto dei microbi sulla piastra di Petri riempita di agar si chiama principio di impatto. Questo metodo ha il vantaggio di non richiedere manipolazioni con filtri. La campionatura viene semplificata e si evita praticamente la contaminazione secondaria.

Criteri per la selezione di raccoglitori di microbi dell'aria conformi all'applicazione

I raccoglitori di microbi dell'aria devono essere maneggevoli e facili da disinfettare. La pratica richiede una calibrazione periodica. Quando si acquista un apparecchio, è quindi importante verificare se questa può essere effettuata anche sul posto, poiché negli ambienti farmaceutici gli apparecchi non sempre possono lasciare il sito. Per il controllo e la validazione di camere bianche, isolatori, RABS, laboratori microbiologici, impianti di biotecnologia e produzione di vaccini, sale operatorie, ospedali e cliniche, può essere utilizzato anche il DUO SAS Super 360, se il risparmio di tempo è un criterio importante. Questo raccoglitore di microbi dell'aria funziona contemporaneamente con 2 contenitori di raccolta e a una velocità di 180 L/minuto.

SAS Super Pinocchio II è progettato per il controllo microbiologico dell'aria e di altri gas compressi nell'industria farmaceutica e alimentare, nonché in altri settori critici. Il gas compresso viene collegato direttamente all'apparecchio. Il periodo di campionamento viene impostato in modo che venga raggiunto il volume totale richiesto (ad esempio 1000 litri).

La campionatura e analisi dell'aria nella pratica

La campionatura:

- Posizionare l'apparecchio su una base stabile
- Aprire il coperchio con foro (con coperchio antipolvere montato)
- Posizionare la piastra di Petri chiusa, riempita di agar, sui supporti per le piastre di Petri
- Rimuovere il coperchio di Petri
- Chiudere il coperchio con foro
- Posizionare la testa di raccolta in base alla direzione del flusso d'aria (la testa di raccolta può essere orientata in qualsiasi angolo tra flusso d'aria orizzontale e verticale)
- Rimuovere il coperchio antipolvere e iniziare la campionatura

L'incubazione:

Ora la piastra di Petri è pronta per l'incubazione. A seconda delle esigenze e delle domande di ricerca, possono essere utilizzati diversi mezzi nutritivi. Esistono diversi mezzi per lieviti, muffe e batteri, che differiscono per composizione e pH. Si consiglia in particolare l'agar DG 18, un mezzo nutritivo speciale per microbi dell'aria. La scelta del tipo di piastra e del mezzo è determinante per la conformità ai principali manuali di farmacologia, norme ISO e cGMP. Di norma, i batteri ambientali vengono incubati per 24-68 ore a 30 °C, mentre lieviti e muffe per almeno 7 giorni a 25 °C.

Durante la manipolazione dei mezzi, devono essere seguite le istruzioni del produttore del mezzo. Così come le piastre di impressione, anche le piastre di Petri con mezzi speciali vengono fornite per il controllo microbiologico dell'aria e delle superfici. Grazie alla confezione sterile tripla delle piastre, queste possono essere trasportate in ambienti con bassa contaminazione o in aree sterili (uno dei tre strati di confezionamento esterno viene rimosso prima di entrare in una camera bianca).

Le piastre di impressione hanno anche il vantaggio che lo stesso tipo di piastra può essere utilizzato sia per controlli dell'aria sia per controlli delle superfici. Al contrario, le piastre di Petri da 90 mm offrono una superficie maggiore per il conteggio delle colonie e sono particolarmente utili quando il numero previsto sulla "piastra" supera le 100 unità formanti colonie.

Le piastre di impressione e le piastre di Petri di VWR sono disponibili con neutralizzatori (Tween, Lecitina, Istidina, Tiosolfato) e con neutralizzatori antibiotici (Penicillinase), per evitare che il conteggio dei microbi sia sottostimato.

VWR offre anche raccoglitori di particelle per il controllo quotidiano secondo ISO 14644/1. Questi vengono utilizzati per la verifica di particelle di dimensioni 0,5 μm e 5 μm. I diversi modelli differiscono principalmente per il numero di canali e le dimensioni delle particelle che possono essere conteggiate. Una stazione di ricarica mantiene il dispositivo in posizione verticale durante l'uso, lo stoccaggio o la ricarica della batteria. La stazione di ricarica presenta anche connessioni dati e alimentazione. Il display LCD e il tastierino a 7 tasti sulla parte frontale dell'apparecchio fungono da interfaccia utente. L'apparecchio conserva i dati raccolti nella memoria flash. I dati rimangono memorizzati anche quando l'apparecchio viene spento. I dati possono essere visualizzati sul display,
trasferiti a un PC o laptop tramite cavo USB, salvati su una chiavetta USB o trasmessi tramite connessione Ethernet. Non è richiesta alcuna software speciale.