Eredmények néhány másodpercen belül

1. ábra

A vonalkód beolvasásával a mintát digitálisan rögzítjük.

Forrás: Fa. bioMérieux

Enterococcus faecium

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

Az MALDI TOF-mass spectrometria (Mátrix-asszisztált lézer / Deszorpció Ionizációs Idő-Of-Flight) során kis mennyiségű mintát helyeznek egy alacsony molekulatartalmú mátrixba. A lézeres besugárzás és a lézersugárzás abszorpciója lehetővé teszi a riboszomális fehérjék kimutatását és azok ujjlenyomatként való megjelenítését. Az így kapott tömegspektrumokat az adatbázis automatikusan kiértékeli, és a eredményeket felsorolja.

A MALDI TOF módszer számos gyakorlati előnnyel jár a hagyományos biokémiai vagy molekuláris biológiai módszerekkel szemben azonosítás terén. Első helyen itt az idő tényező áll: a minták előkészítése után a készülékbe helyezve a kívánt eredmények néhány másodpercen belül rendelkezésre állnak. Mivel a gyanús diagnózis felállítása a kórokozó azonosítására nem szükséges, a feldolgozás annál gyorsabban történhet. A mintavétel a legtöbb mikroorganizmus esetében ugyanaz, csak a gombák és penészgombák azonosításánál bonyolultabb a feldolgozás. A MALDI TOF segítségével – függetlenül az inkubációs időtől és a táptalajtól, amelyből a minta származik – ugyanakkora megbízható és helyes eredmények érhetők el.

Üzemeltetési higiéniai azonosítások

A MALDI TOF-mass spectrometria (pl. bioMerieux VITEK MS) hitelesített azonosítási módszer 24-72 órás inkubációval készült tenyészetek esetében. Ugyanakkor valószínű, hogy a módszer előnyei miatt lehetőség nyílik arra, hogy az azonosításokat közvetlenül az eredeti mintából végezzék el. A fókuszban itt a szilárd táptalajon tenyészett kultúrák állnak, például tapogatós és ülepedési táblák, valamint levegőben lévő baktériumszám-mérések és bouillonok.

Cél, hogy a lehető legrövidebb idő alatt legalább durva azonosítást kapjunk. Különösen a higiéniai monitorozás során végzett minták értékelése esetén ez idő- és költségmegtakarítást jelenthet a gyártási folyamat szempontjából.

Így a higiéniai minták gyors feldolgozása általában a gyártóberendezések üzemidejének csökkenéséhez vezet. Továbbá, ha akciós határértékek lépnek életbe, célzott oknyomozás végezhető, ami befolyásolhatja a tisztítási folyamatokat. Ha az azonosítás eredményei gyorsabban rendelkezésre állnak, az vizsgálati tárgy azonnal jóváhagyható, így kisebb vagy egyáltalán nem lesz raktározási költség. Emellett a tisztítási validációk gyorsabban befejeződnek, és így a helyiségek gyorsabban szabadíthatók fel.

Projekt: Közvetlen azonosítás eredeti mintából

Egy projekt során a higiéniai monitorozásból származó eredeti mintákon (tapogatós táblák és levegőben lévő baktériumszám-mérésekhez használt táptalajok) a mikroorganizmusokat további feldolgozás nélkül alkalmazták az azonosításhoz a VITEK MS segítségével. A molekuláris módszer eredményeit összehasonlították a párhuzamosan végzett biokémiai azonosítás eredményeivel, és egy táblázatban összegzették (lásd 1. ábra).

A eredmények 82%-a megfelelt a hagyományos biokémiai módszerek eredményeinek. 18%-ban nem adtak meg azonosítási eredményt. A eredmények tükrözik a MALDI TOF MS már meglévő tapasztalatait.

A staphylococcusok és mikrokococcusok – de pseudomonadák és enterococcusok is – jó megbízhatósággal azonosíthatók, feltéve, hogy az adott mikroorganizmus szerepel az adatbázisban. Azonosításuk azonban még mindig nehézségekbe ütközik, például sajátos növekedési tulajdonságaik miatt.

Például, ha nyálkás, vizes kolóniákat alkotnak (bazillusok, laktobacillusok), vagy csak nagyon finom növekedést mutatnak (coryneform baktériumok, listeria), akkor kevés tömeget detektálnak. Ilyenkor a készülék nem ad eredményt.

A kevert kultúrákat nem ismeri fel, ezért elengedhetetlen egy friss szubkultúra egy teljes táptalajon. Ez egyébként is szükséges a végső plausibilitás ellenőrzéséhez. Ezért a közvetlen azonosítás bouillonból problémás lehet.

Itt további feltételeknek is teljesülniük kell. Például legalább 10^4 KBE/ml baktériumszám szükséges ahhoz, hogy a centrifugálással nyert pellet felhasználható legyen a feldolgozás során. Nem szabadnak jelen lenniük más összetevőknek, például géleknek vagy szilárd anyagoknak, amelyek zavarhatják a mérést.

Általánosságban elmondható, hogy közvetlen azonosítás eredeti mintából is végrehajtható, különösen szilárd táptalajon tenyészett kultúrák esetében.