Resultaten binnen enkele seconden

Figuur 1

Door het scannen van de barcode wordt het monster digitaal vastgelegd.

Bron: Fa. bioMérieux

Enterococcus faecium

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

Bij de MALDI TOF-massaspectrometrie (Matrix-assisted Laser / Desorptie Ionisatie Time Of Flight) worden kleine hoeveelheden van een monster in een laagmoleculaire matrix geplaatst. Laserbeschieting en absorptie van de laserstraling maken het mogelijk om ribosomale eiwitten te detecteren en deze weer te geven als een "vingerafdruk". De zo verkregen massaspectra worden automatisch door de database geëvalueerd, en de resultaten worden weergegeven.

De MALDI TOF-methode biedt ten opzichte van traditionele biochemische of moleculairbiologische methoden voor identificatie een aantal praktische voordelen. Allereerst staat hier de factor tijd: na invoer van het voorbereide monster in het apparaat liggen de gewenste resultaten binnen enkele seconden klaar. Omdat een voorafgaande verdenking op de kiemidentificatie niet nodig is, kan de verwerking des te sneller plaatsvinden. De monsteraanvoer is voor de meeste micro-organismen gelijk, alleen voor de identificatie van gisten en schimmels is de verwerking arbeidsintensiever. Met MALDI TOF kunnen – onafhankelijk van incubatietijd en voedingsmedium, waarvan het monster wordt genomen – even betrouwbare als correcte resultaten worden behaald.

Operationele hygiënische identificaties

Het MALDI TOF-massaspectrometer (Fa. bioMerieux, VITEK MS) is gevalideerd voor het identificeren van micro-organismen met 24 tot 72 uur geïncubeerde zuivere culturen. Het ligt echter voor de hand dat, vanwege de voordelen van de methode, de mogelijkheid bestaat om identificaties direct van het originele product uit te voeren. In de focus staan hier culturen op vaste voedingsmedia zoals afstrijk- en sedimentatieplaten, evenals media uit luchtkiemgetellingen en bouillons.

Het doel is om in een zo kort mogelijke tijd ten minste een grove identificatie te verkrijgen. Vooral bij de evaluatie van monsters uit het hygiënemonitoring kan dit tijd- en kostenbesparend zijn in relatie tot het productieproces.

Een snelle verwerking van hygiëneproeven leidt doorgaans tot kortere stilstandtijden van de productielijnen. Daarnaast kan bij het optreden van actiegrenzen gericht oorzakenonderzoek worden gedaan, wat mogelijk invloed heeft op de reinigingsprocessen. Als de resultaten van de identificatie sneller beschikbaar zijn, kan het onderzoek snel worden vrijgegeven, waardoor minder of geen opslagkosten ontstaan. Bovendien kunnen reinigingsvalidaties sneller worden afgerond en kunnen ruimtes sneller worden vrijgegeven.

Project: Directe identificatie van originele monsters

In een project zijn de micro-organismen die op originele monsters uit het hygiënemonitoring (afstrijkplaten en voedingsmedia voor luchtkiemgetal) aanwezig waren, zonder verdere voorbereiding gebruikt voor de identificatie met de VITEK MS. De resultaten van de moleculaire methode werden vergeleken met die van de parallel uitgevoerde biochemische identificatie en samengevat in een tabel (zie figuur 1).

82 procent van de resultaten kwam overeen met de resultaten van de traditionele biochemische methoden. Bij 18 procent van de metingen werd geen identificatieresultaat vermeld. De resultaten weerspiegelen de reeds bestaande ervaringswaarden met de MALDI TOF MS.

Stafylokokken en microcokken – maar ook pseudomonaden en enterokokken – worden hierbij met goede betrouwbaarheidswaarden geïdentificeerd, op voorwaarde dat de betreffende micro-organismen in de gebruikte database zijn opgenomen. De identificatie van sommige bacteriën blijft echter nog steeds moeilijk, bijvoorbeeld vanwege hun specifieke groeieigenschappen.

Als ze bijvoorbeeld slijmerige, waterige kolonies vormen (bazillen, lactobacillen) of slechts zeer fijn kiemgroei vertonen (coryneforme bacteriën, listeria), worden te weinig massa's gedetecteerd. Het apparaat geeft dan geen resultaat.

Gemengde culturen worden niet als zodanig herkend, daarom is een verse subcultuur op een volmedium onmisbaar. Deze is bovendien nodig voor de definitieve plausibiliteitscontrole. Om die reden zijn ook identificaties direct uit een bouillon problematisch.

Hier moeten bovendien aanvullende voorwaarden worden voldaan. Zo is een kiemgetal van minimaal 10^4 KBE/ml nodig om het door centrifugatie verkregen pellet te kunnen gebruiken voor de verwerking. Daarbij mogen geen andere bestanddelen, zoals gels of vaste stoffen, aanwezig zijn die de meting verstoren.

Het is in het algemeen mogelijk om identificaties direct van originele monsters uit te voeren, vooral voor culturen op vaste voedingsmedia.