Resultados en segundos

Fig. 1

Al escanear el código de barras, la muestra se registra digitalmente.

Fuente: Fa. bioMérieux

Enterococcus faecium

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

En la espectrometría de masas MALDI TOF (Ionización por Láser Asistida por Matriz / Tiempo de Vuelo) se colocan pequeñas cantidades de una muestra en una matriz de bajo peso molecular. La exposición al láser y la absorción de la radiación láser permiten identificar proteínas ribosomales y representarlas como una "huella dactilar". Los espectros de masas obtenidos de esta manera son analizados automáticamente por la base de datos, y los resultados se muestran.

El método MALDI TOF ofrece varias ventajas prácticas en comparación con los métodos bioquímicos o moleculares tradicionales para la identificación. La principal es el factor tiempo: tras introducir la muestra preparada en el aparato, los resultados deseados están disponibles en segundos. Dado que no es necesaria una sospecha previa para la identificación del microorganismo, el proceso puede realizarse aún más rápido. La preparación de la muestra es la misma para la mayoría de los microorganismos, solo para la identificación de levaduras y mohos el proceso es más laborioso. Con MALDI TOF se pueden obtener resultados igualmente informativos y precisos, independientemente del tiempo de incubación y del medio de cultivo del material de la muestra.

Identificaciones en higiene operacional

El espectrómetro de masas MALDI TOF (Empresa bioMerieux, VITEK MS) está validado para identificar microorganismos a partir de cultivos puros incubados durante 24 a 72 horas. Sin embargo, es probable que, debido a las ventajas del método, exista la posibilidad de realizar identificaciones directamente a partir del producto original. Se centra en cultivos en medios sólidos, como placas de contacto y sedimentación, así como en medios utilizados en conteo de microorganismos en aire y en medios en caldo.

El objetivo es obtener al menos una identificación aproximada en el menor tiempo posible. Especialmente en la evaluación de muestras de monitoreo de higiene, esto puede significar un ahorro de tiempo y costos en relación con el proceso de producción.

Una rápida preparación de las muestras de higiene generalmente conduce a tiempos de parada reducidos en las instalaciones de producción. Además, en caso de que se alcancen límites de acción, se puede investigar específicamente la causa, lo que puede influir en los procesos de limpieza. Cuando los resultados de la identificación se obtienen más rápidamente, la muestra puede ser liberada en poco tiempo, reduciendo o eliminando los costos de almacenamiento. Además, las validaciones de limpieza pueden completarse más rápidamente, permitiendo una liberación más ágil de los espacios.

Proyecto: identificación directa a partir de muestras originales

En un proyecto, se utilizaron microorganismos presentes en muestras originales de monitoreo de higiene (placas de contacto y medios de cultivo para conteo de microorganismos en aire) sin ningún procesamiento adicional para la identificación con VITEK MS. Los resultados del método molecular se compararon con los de la identificación bioquímica realizada en paralelo y se resumieron en una tabla (ver Fig. 1).

El 82 por ciento de los resultados coincidieron con los resultados de los métodos bioquímicos ortodoxos. En el 18 por ciento de las mediciones no se proporcionó un resultado de identificación. Los resultados reflejan las experiencias previas con MALDI TOF MS.

Las bacterias coagulasa-positivas y micrococos, así como Pseudomonas y Enterococcus, se identifican con buenos valores de confianza, siempre que el microorganismo esté registrado en la base de datos utilizada. Sin embargo, la identificación de algunas bacterias todavía presenta dificultades, por ejemplo, debido a sus características específicas de crecimiento.

Si, por ejemplo, forman colonias viscosa-pegajosas (Bacillus, Lactobacillus) o muestran un crecimiento microbiano muy fino (coryneformes, Listeria), se detectan muy pocos masas. En estos casos, el aparato no proporciona ningún resultado.

Las culturas mixtas no se reconocen como tales, por lo que es imprescindible una subcultura fresca en un medio completo. Esto también es necesario para la verificación final de plausibilidad. Por esta razón, las identificaciones directas a partir de un caldo también son problemáticas.

Además, deben cumplirse otras condiciones. Se requiere una cantidad de microorganismos de al menos 10^4 UFC/ml para poder usar el sedimento obtenido por centrifugación para el análisis. Además, no deben estar presentes otros componentes, como geles o sólidos, que puedan interferir en la medición.

En general, es posible realizar identificaciones directamente a partir de muestras originales, especialmente para cultivos en medios sólidos.