Risultati in pochi secondi

Fig. 1

Scansionando il codice a barre, il campione viene registrato digitalmente.

Fonte: Fa. bioMérieux

Enterococcus faecium

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

Durante la spettrometria di massa MALDI TOF (Matrix-assisted Laser / Desorption Ionisation Time Of Flight), vengono prelevate piccole quantità di un campione e poste in una matrice a basso peso molecolare. L'irradiazione laser e l'assorbimento della radiazione laser permettono di visualizzare proteine ribosomiali e di rappresentarle come  "impronta digitale". Gli spettri di massa così ottenuti vengono analizzati automaticamente dal database, che riporta i risultati.

Il metodo MALDI TOF offre, rispetto ai metodi biochimici o molecolari tradizionali per l'identificazione, una serie di vantaggi pratici. In primo luogo, il fattore tempo: dopo aver inserito il campione preparato nell'apparecchio, i risultati desiderati sono disponibili in pochi secondi. Poiché non è necessaria una diagnosi sospetta preventiva riguardo all'identificazione del microrganismo, l'elaborazione può essere effettuata ancora più rapidamente. La preparazione del campione è uguale per la maggior parte dei microrganismi, solo per l'identificazione di lieviti e muffe il procedimento è più complesso. Con MALDI TOF si possono ottenere risultati altrettanto affidabili e corretti, indipendentemente dal tempo di incubazione e dal mezzo di coltura da cui si preleva il materiale del campione.

Identificazioni di igiene operativa

Il spettrometro di massa MALDI TOF (ad esempio, VITEK MS della bioMerieux) è validato per l'identificazione di microrganismi da colture pure incubate per 24-72 ore. Tuttavia, è probabile che, grazie ai vantaggi del metodo, si possa offrire la possibilità di effettuare identificazioni direttamente dal prodotto originale. L'attenzione si concentra su colture su supporti solidi come piastre di impronte e di sedimentazione, nonché su mezzi di coltura derivanti da determinazioni della carica microbica aerobia e brodi.

L'obiettivo è ottenere, nel minor tempo possibile, almeno una classificazione approssimativa. Soprattutto nell'analisi di campioni di monitoraggio igienico, ciò può significare un risparmio di tempo e costi in relazione al processo produttivo.

Una rapida elaborazione dei campioni di igiene di solito porta a una riduzione dei tempi di fermo delle apparecchiature di produzione. Inoltre, in presenza di limiti di azione, si può condurre una ricerca mirata delle cause, che potrebbe influire sui processi di pulizia. Se i risultati dell'identificazione arrivano più rapidamente, l'oggetto dell'analisi può essere rilasciato tempestivamente, riducendo o eliminando i costi di stoccaggio. Inoltre, le validazioni delle pulizie possono essere concluse più rapidamente, consentendo di liberare gli ambienti in modo più tempestivo.

Progetto: identificazione diretta da campioni originali

In un progetto, i microrganismi presenti su campioni originali di monitoraggio igienico (piastre di impronte e mezzi di coltura per la determinazione della carica microbica aerobia) sono stati identificati senza ulteriori preparazioni tramite VITEK MS. I risultati del metodo molecolare sono stati confrontati con quelli dell'identificazione biochimica parallela e riassunti in una tabella (vedi Fig. 1).

L'82% dei risultati corrispondeva a quelli ottenuti con metodi biochimici tradizionali. Nel 18% dei casi, non sono stati forniti risultati di identificazione. I risultati riflettono le esperienze già acquisite con MALDI TOF MS.

Stafilococchi e micrococchi, ma anche pseudomonadi ed enterococchi, vengono identificati con buoni valori di confidenza, a condizione che il microrganismo sia presente nel database utilizzato. Tuttavia, l'identificazione di alcuni batteri presenta ancora difficoltà, ad esempio a causa delle loro caratteristiche di crescita specifiche.

Se, ad esempio, formano colonie viscide e gelatinose (bazille, lattobacilli) o mostrano solo una crescita microbica molto fine (coryneforme,Listeria), vengono rilevati pochi campi di massa. In questo caso, l'apparecchio non fornisce alcun risultato.

Le colture miste non vengono riconosciute come tali, quindi è indispensabile una subcoltura fresca su un supporto completo. Questa è comunque necessaria per il controllo finale di plausibilità. Per questo motivo, anche le identificazioni dirette da brodi sono problematiche.

Inoltre, devono essere soddisfatte altre condizioni. È necessario un numero di microrganismi di almeno 10^4 UFC/ml, affinché il pellet ottenuto tramite centrifugazione possa essere utilizzato per l'elaborazione. Inoltre, non devono essere presenti altri componenti, come gel o solidi, che possano disturbare la misurazione.

In generale, è possibile effettuare identificazioni direttamente da campioni originali, soprattutto per le colture su supporti solidi di nutrimento.