Wyniki w ciągu sekund

Rys. 1

Skanując kod kreskowy, próbka jest rejestrowana cyfrowo.

Źródło: Firma bioMérieux

Enterococcus faecium

Staphylococcus aureus

Pseudomonas aeruginosa

Podczas spektrometrii masowej MALDI TOF (Matrix-assisted Laser / Desorption Ionisation Time Of Flight) niewielkie ilości próbki umieszcza się w niskocząsteczkowej macierzy. Uderzenie laserowe i absorpcja promieniowania laserowego umożliwiają wykrycie białek rybosomalnych i ich przedstawienie jako „odcisku palca”. Uzyskane spektra masowe są automatycznie analizowane przez bazę danych, a wyniki są wyświetlane.

Metoda MALDI TOF oferuje w porównaniu do tradycyjnych metod biochemicznych lub molekularnych do identyfikacji szereg praktycznych zalet. Na pierwszym miejscu stoi tutaj czynnik czas: po wprowadzeniu przygotowanej próbki do urządzenia, oczekiwane wyniki są dostępne w ciągu kilku sekund. Ponieważ wstępna diagnoza podejrzewanej infekcji nie jest konieczna, obróbka może przebiegać znacznie szybciej. Podejście do próbki jest zazwyczaj takie samo dla większości mikroorganizmów, jedynie w przypadku identyfikacji drożdży i pleśni obróbka jest bardziej skomplikowana. Dzięki MALDI TOF można — niezależnie od czasu inkubacji i medium od którego pobierana jest próbka — osiągnąć równie wiarygodne, jak i poprawne wyniki.

Identyfikacje higieniczne

Zweryfikowany jest spektrometr masowy MALDI TOF (Firma bioMerieux, VITEK MS) do identyfikacji mikroorganizmów z hodowli inkubowanych od 24 do 72 godzin. Jednakże wydaje się, że ze względu na zalety metody istnieje możliwość przeprowadzania identyfikacji bezpośrednio z oryginalnego produktu. W centrum uwagi znajdują się tutaj hodowle na stałych podłożach odżywczych, takich jak plamy odciskowe i płyty sedymentacyjne, a także media z pomiarów liczby drobnoustrojów w powietrzu i bulionach.

Celem jest uzyskanie co najmniej przybliżonej identyfikacji w możliwie najkrótszym czasie. Szczególnie przy analizie próbek z monitoringu higieny może to oznaczać oszczędność czasu i kosztów w odniesieniu do procesu produkcyjnego.

Tak szybka obróbka próbek higienicznych zazwyczaj prowadzi do skrócenia czasu pracy urządzeń produkcyjnych. Ponadto, w przypadku wystąpienia granic działania, można celowo przeprowadzić badania przyczynowe, co może mieć wpływ na procesy czyszczenia. Jeśli wyniki identyfikacji są dostępne szybciej, można je zatwierdzić w krótkim czasie, co zmniejsza lub eliminuje koszty magazynowania. Dodatkowo, walidacje czyszczenia można przeprowadzić szybciej, co pozwala na szybsze udostępnienie pomieszczeń.

Projekt: Identyfikacja bezpośrednio z oryginalnych próbek

W ramach projektu mikroorganizmy znajdujące się na oryginalnych próbkach z monitoringu higieny (płytki odciskowe oraz media odżywcze do pomiaru liczby drobnoustrojów w powietrzu) zostały użyte do identyfikacji za pomocą VITEK MS bez dalszej obróbki. Wyniki metody molekularnej zostały porównane z wynikami równoległej identyfikacji biochemicznej i podsumowane w tabeli (patrz rys. 1).

82 procent wyników odpowiadało wynikom tradycyjnych metod biochemicznych. W 18 procentach pomiarów nie podano wyniku identyfikacji. Wyniki odzwierciedlają już istniejące doświadczenia z MALDI TOF MS.

Staphylococcus i Micrococcus — ale także Pseudomonas i Enterococcus — są identyfikowane z dobrymi wartościami pewności, pod warunkiem, że dany mikroorganizm jest zapisany w używanej bazie danych. Jednak identyfikacja niektórych bakterii nadal sprawia trudności, na przykład ze względu na ich specyficzne cechy wzrostu.

Na przykład, jeśli tworzą śluzowate kolonie (pałeczki, laktobacyle) lub wykazują bardzo drobny wzrost drobnoustrojów (bakterie coryneforme, listerie), wykrywa się zbyt mało mas. W takim przypadku urządzenie nie podaje wyniku.

Mieszane kultury nie są rozpoznawane jako takie, dlatego niezbędne jest świeże podłoże hodowlane na pełnym podłożu. Jest ono również konieczne do końcowej kontroli wiarygodności. Z tego powodu identyfikacje bezpośrednio z bulionu są problematyczne.

W tym przypadku muszą być spełnione dodatkowe warunki. Na przykład, liczba drobnoustrojów powinna wynosić co najmniej 10^4 KBE/ml, aby można było użyć osadu uzyskanego przez wirowanie do obróbki. Nie powinny się w nim znajdować żadne inne składniki, takie jak żele czy ciała stałe, które mogą zakłócać pomiar.

Ogólnie możliwe jest przeprowadzanie identyfikacji bezpośrednio z oryginalnych próbek, zwłaszcza w przypadku kultur na stałych podłożach odżywczych.