Celui qui dit A devrait aussi dire B

Lingettes de nettoyage en salle blanche typiques pour différentes applications.

Dans le secteur de l'industrie pharmaceutique, une attention particulière est portée depuis longtemps à la charge en endotoxines des produits et des matériaux d'utilisation. Par exemple, la teneur en endotoxines des gants et des produits chimiques de procédé tels que le WFI (eau pour injections) doit être régulièrement vérifiée et le processus de fabrication validé. Le sujet est également de plus en plus pris en compte dans le domaine du nettoyage des salles stériles, ce qui se traduit notamment par une utilisation accrue de WFI dans la fabrication de produits de nettoyage et de désinfection. Les fabricants de produits de nettoyage répondent à ces exigences par des procédés de fabrication validés et certifiés, garantissant aux utilisateurs des teneurs en endotoxines définies pour leurs produits. Les fournisseurs de lingettes de nettoyage ont également reconnu ce besoin et ont développé des produits adaptés, optimisés pour une utilisation avec d'autres produits à faible teneur en endotoxines. Il est frappant de constater qu'actuellement, on utilise nettement plus de gants et de liquides de nettoyage à faible endotoxines que de lingettes de nettoyage correspondantes. Cela conduit à supposer que, dans de nombreux cas, des processus de nettoyage à faible endotoxines sont recherchés, mais que ces processus ne sont pas encore appliqués de manière cohérente.

Les endotoxines sont des composants de la membrane externe des bactéries Gram-négatives, constitués de lipopolysaccharides. Elles ne sont pas produites par les bactéries pour leur libération, mais se trouvent, chez les bactéries Gram-négatives, en surface in vivo ou sont libérées lors de la mort des bactéries sous forme de fragments de cellules. Leur importance médicale repose sur leur propriété physiologiquement active, qui peut provoquer des réactions immunitaires telles que la fièvre ou l'inflammation lors de leur entrée dans le corps humain. Les endotoxines appartiennent donc au groupe des pyrogènes, et dans de nombreuses publications, les termes pyrogène et endotoxine sont utilisés de manière interchangeable. Outre les médicaments administrés par voie parentérale, il existe également des limites maximales de charge pour les produits médicaux qui entrent en contact avec des fluides corporels lors de leur utilisation prévue. Ces limites sont exprimées en unités d'endotoxines (EU) et, par exemple, pour le liquide céphalo-rachidien, elles sont de 2,15 EU/ appareil, et pour la lymphe / le sang, de 20 EU/appareil (Ph. Eur. 2.6.14 et USP Chapter 85). D'autres limites s'appliquent pour le contact avec les organes internes, le système digestif et la peau, dans un ordre décroissant. La définition de ces limites est notamment assurée par la pharmacopée européenne et américaine.

Pour déterminer les EU conformément aux pharmacopées mentionnées ci-dessus (Ph. Eur. 2.6.14 et USP Chapter 85), différentes méthodes d'analyse utilisant le test LAL sont disponibles pour les utilisateurs et les fabricants. Ce test, basé sur le lysat d'amébocytes du sang du crabe dehors, coagule en présence d'endotoxines et permet une détermination quantitative via une lecture par microplaquettes, par turbidimétrie ou par réaction colorimétrique. Cette méthode d'analyse, approuvée par les pharmacopées, permet une détection très sensible. L'utilisation de ces animaux comme donneurs ne constitue pas une exploitation des ressources animales, car les crabes dehors sont relâchés après la collecte du lysat et leur population est contrôlée. Depuis plusieurs années, une alternative non autorisée par les pharmacopées consiste également à utiliser une méthode basée sur la technologie de liaison aux phages, entièrement biotechnologique, sans composants animaux, et pouvant être évaluée par fluorescence dans un lecteur de microplaquettes.

Mais pourquoi les endotoxines sont-elles critiques dans l'industrie pharmaceutique ? Les produits utilisés sont pourtant stérilisés avant utilisation. Malheureusement, les endotoxines sont extrêmement résistantes et survivent à la fois à la stérilisation par vapeur chaude et à la gamma irradiation, de manière relativement intacte. Ce n'est qu'avec la chaleur sèche ou des doses élevées de rayonnement gamma que la charge en endotoxines peut être réduite, bien que différentes publications indiquent des degrés de réduction variables. Cependant, la plupart des produits ne supportent pas une telle stérilisation rigoureuse sans dommage, et des alternatives pour leur élimination ultérieure doivent être trouvées. Pour les liquides comme le WFI ou les désinfectants, la filtration ultrafiltrante à l'aide de filtres chargés positivement et l'utilisation de filtres à charbon actif offrent une possibilité supplémentaire de séparation des endotoxines. Sur les surfaces solides, où les endotoxines sont fixées par séchage, leur élimination est beaucoup plus difficile. Il est recommandé, par exemple, un traitement thermique à +200°C pendant 5 heures ou un bain de 15 heures dans une solution de soude à 1 mol.

Comme la quantité d'endotoxines dans ou sur un produit dépend en partie du nombre total de micro-organismes, et qu'il est difficile de les éliminer ou de les détruire ultérieurement sur des surfaces solides, la clé pour contrôler la charge en endotoxines réside dans la réduction cohérente du nombre de micro-organismes tout au long du processus de fabrication. Pour la fabrication de lingettes de nettoyage, cela implique de vérifier et de valider la pureté microbienne de toutes les étapes du processus et des agents utilisés. Les lingettes fabriquées selon ces procédés sont commercialisées comme « exemptes d'endotoxines », ce qui ne signifie pas une absence totale de toutes les endotoxines, mais que les limites réglementaires des pharmacopées sont respectées. Récemment, différentes lingettes ont été mises sur le marché, respectant la limite la plus stricte pour le contact avec le liquide céphalo-rachidien, fixée à 2,15 EU/pièce (0,06 EU/ml selon USP Chapter 161). En fonction des exigences concernant la résistance à l'abrasion, des versions à base de viscose/polyester ou de polyester pur, à faible teneur en endotoxines, sont disponibles.

Lors du nettoyage de zones stériles très sensibles aux endotoxines, il est désormais possible d'établir des processus de nettoyage sûrs avec des produits de nettoyage à faible endotoxines, sans risquer de contamination par transfert du linge de nettoyage vers la surface.