Sprawdzone metody testowania skuteczności środków dezynfekcyjnych

Podsumowanie

Środki dezynfekcyjne i sporizidy są niezbędne do kontroli kontaminacji mikrobiologicznych w przemyśle farmaceutycznym, biotechnologicznym i medycznym. Od zakładów produkcyjnych GMP oczekuje się, że będą potrafiły, na podstawie specyficznych dla lokalizacji metod przygotowania opisanych w standardowych procedurach, wykazać, że biozidy stosowane w kontrolowanych środowiskach są skuteczne przeciwko izolatom środowiskowym na reprezentatywnych powierzchniach w ich zakładach. W tym artykule przedstawione są najczęstsze problemy zgłaszane przez inspektorów urzędowych i występujące podczas kwalifikacji środków dezynfekcyjnych i sporizidów, a także możliwe trudności w przeprowadzaniu in vitro testów skuteczności.

Kwalifikacja środka dezynfekcyjnego

1. Test in vitro

Test laboratoryjny, który pokazuje skuteczność wybranych chemikaliów przeciwko izolatom środowiskowym na reprezentatywnych powierzchniach specyficznych dla zakładu.

2. Test in situ

Statystyczne porównanie częstości izolacji i liczby mikroorganizmów wyizolowanych przed i po zastosowaniu nowego środka dezynfekcyjnego (dane uzyskiwane poprzez monitorowanie środowiska).

Dlaczego należy kwalifikować środki dezynfekcyjne?

- Oczekuje się tego od urzędów jako części wiarygodnego programu czyszczenia i dezynfekcji – Ocena przydatności, skuteczności i ograniczeń środków dezynfekcyjnych i procedur ("The suitability, efficacy, and limitations of disinfecting agents and procedures should be assessed").2

- Wymagania rejestracyjne EPA dla produktów biobójczych nie określają, jak mają być one używane w przemyśle farmaceutycznym, biotechnologicznym i medycznym.

FDA 483/Kategorie listów ostrzegawczych

-Brak danych potwierdzających przydatność używanych biozidów

- Izolaty środowiskowe nie zawarte w teście

- Testowe próbki nie są reprezentatywne dla podłóg, ścian i powierzchni roboczych w obszarze aseptycznym, w tym zużytych lub uszkodzonych powierzchni

- Brak danych potwierdzających datę ważności roztworów użytkowych (np. czas przechowywania)

- Brak danych dotyczących definicji czasu kontaktu (czas kontaktu z widocznie mokrymi powierzchniami, który powinien być osiągnięty w czasie określonym w standardowych procedurach zakładu)

Rekwalifikacja

- Coroczna weryfikacja w celu oceny ryzyka i wprowadzonych zmian

- Rekwalifikacja może być konieczna w następujących przypadkach:
• Wprowadzenie nowych środków dezynfekcyjnych
• Zmiana liczby mikroorganizmów w środowisku i/lub wyizolowanie odporne na środki (np. B. cereus)
• Wprowadzenie nowych powierzchni
• Zmiany w krytycznych parametrach stosowania środków dezynfekcyjnych

Test in vitro

Najczęstsze przyczyny niezaliczenia testów:

Ogólne:

- Testowanie biozidów przeciwko nieprawidłowym mikroorganizmom
- Używanie nieodpowiednich metod
- Niewłaściwe planowanie
- Niewystarczający czas kontaktu

Neutralizacja:

- Nieodpowiednia neutralizacja
- Toksyczność neutralizatora

Inokulum:

- Niska żywotność zawiesin inokulum
- Nieprawidłowo przygotowane zawiesiny sporowe grzybów i bakterii

Powierzchnie:

- Porowate powierzchnie
- Próbki testowe nie dostępne do sterylizacji parowej
- Nierównomierne inokulowanie lub pokrycie produktu z powodu pęcherzyków powietrza lub napięcia powierzchniowego

Wykrywanie:

- Zanik działania po wyschnięciu (np. P. aeruginosa)
- Ustalanie sztucznie wysokich celów redukcji logarytmicznej
- Końcowe płytki nie są zliczalne
- Metoda wykrywania niezwalidowana

Ważne rozważania w celu uniknięcia niezaliczenia testów

Ogólne

- Czytanie etykiet produktów, aby zrozumieć wymagania i ograniczenia poszczególnych produktów (np. wymagania dotyczące skuteczności i czasów kontaktu).

- Używanie odpowiedniego typu chemikaliów dla docelowych organizmów (np. nie stosować 70% IPA lub związków czwartorzędowych przeciwko endosporom bakteryjnym).

- Metody AOAC nie są odpowiednie do tych testów (niektóre procedury, takie jak przygotowanie inokulum i sporowych zawiesin, mogą być jednak przydatne).

- Metody ASTM E2197 i EN-13697 zapewniają cenne informacje w zakresie ilościowych testów powierzchniowych.

- Nie łączyć fizycznego usuwania z chemicznym usuwaniem w jednym badaniu.

- Uwzględniać daty ważności określone w wewnętrznych standardowych procedurach w badaniu.

- Spójność jest nieodzowna dla uzyskania wyniku.

- Wstępne planowanie jest niezwykle ważne i może wymagać kilku testów eksperymentalnych.

Neutralizacja

- Metoda neutralizacji musi być zwalidowana.

- Należy przetestować skuteczność i toksyczność neutralizatora.

- Przed rozpoczęciem badania mogą być konieczne próby i eksperymenty.

- Nie ma uniwersalnego neutralizatora dla wszystkich środków dezynfekcyjnych.

Inokulum

- Przygotować zawiesiny bakteryjne z kultur trwających 18-24 godziny i natychmiast nimi zainfekować powierzchnie; nie używać przez kilka dni.

- Do testowania i weryfikacji zawartości sporów używać zawiesin grzybów, ponieważ hyfy/miazgi mogą uniemożliwić kontakt i penetrację sporów przez biozid.

- Zawiesiny bakteryjne sporów przygotować zgodnie z zalecaną metodą, np. AOAC; ≥90% spor.

Powierzchnie

- Mniejsze próbki testowe (1–2 cm) można łatwiej obsługiwać i neutralizować.

- Resztki usuwać za pomocą 70% IPA.

- Używać alternatywnych metod sterylizacji (np. VHP®, suchym ciepłem), jeśli powierzchni nie można autoklawować.

Wykrywanie

- Metoda wykrywania musi być zwalidowana.

- Użycie ultradźwięków może wspomóc wykrywanie.

- Zainfekowane próbki testowe wysuszyć jak najkrócej i natychmiast przeprowadzić test.

- Metodę wykrywania ocenić przed rozpoczęciem formalnych testów w badaniach eksperymentalnych.

Uwagi końcowe

Kwalifikacja środków dezynfekcyjnych jest kluczowym krokiem w walidacji procesu dezynfekcji stosowanego w sterylnych zakładach produkcyjnych. Niezależnie od tego, czy test in vitro jest przeprowadzany wewnętrznie, czy w laboratorium zewnętrznym, konieczne jest staranne planowanie, dokładne przestrzeganie szczegółów i duża ostrożność, aby uniknąć licznych problemów i trudności związanych z tymi badaniami, i osiągnąć pozytywny wynik.

Bibliografia

1. USP 37 Ch Disinfectants and Antiseptics.
2. Wytyczne FDA dla przemysłu, Sterylne produkty farmaceutyczne wytwarzane metodami aseptycznymi – Obecne Dobre Praktyki Produkcyjne. wrzesień 2004. s. 34.