Ověřené postupy pro testování účinnosti dezinfekčních prostředků

Souhrn

Dezinfekční prostředky a sporizidy jsou nezbytné pro kontrolu mikrobiální kontaminace v farmaceutickém, biotechnologickém a zdravotnickém průmyslu. Od GMP výrobních závodů se očekává, že na základě místně specifických přípravných metod, které jsou popsány ve standardních provozních postupech, budou schopny prokázat, že biozidy používané v kontrolovaném prostředí jsou účinné proti izolátům z prostředí na reprezentativních površích v jejich závodech. V tomto článku jsou představena běžná problémová místa, která inspektoři státních úřadů často vytýkají, a která se objevují při kvalifikaci dezinfekčních prostředků a sporizidů, a jsou zde uvedeny možné potíže při provádění in vitro testů účinnosti.

Kvalifikace dezinfekčního prostředku

1. In vitro - test

Laboratorní test, který ukazuje účinnost vybraných chemikálií proti izolátům z prostředí na reprezentativních površích specifických pro zařízení.

2. In situ - test

Statistické srovnání frekvence izolací a počtu mikroorganismů izolovaných před a po použití nového dezinfekčního prostředku (data jsou získávána monitorováním prostředí).

Proč by měly být dezinfekční prostředky kvalifikovány?

- Očekává se od nich ze strany úřadů jako součást spolehlivého programu čištění a dezinfekce – vhodnost, účinnost a omezení dezinfekčních prostředků a postupů by měly být posouzeny ("The suitability, efficacy, and limitations of disinfecting agents and procedures should be assessed").2

- Požadavky na registraci biozidů od EPA nestanovují, jak mají být tyto produkty používány v farmaceutickém, biotechnologickém a zdravotnickém průmyslu.

FDA 483 / Kategorie varovných dopisů

-Nejsou dostupná data potvrzující vhodnost používaných biozidů

- Izoláty z prostředí nejsou zahrnuty v testech

- Testovací vzorky nejsou reprezentativní pro podlahy, stěny a pracovní plochy v aseptickém prostředí, včetně opotřebovaných nebo poškozených povrchů

- Nejsou k dispozici data potvrzující datum expirace použitých roztoků (např. doba skladování)

- Nejsou k dispozici data o definici doby kontaktu (doba kontaktu s viditelně mokrými povrchy by měla být dosažitelná v časovém rámci uvedeném v provozních postupech závodu)

Rekvalifikace

- Roční kontrola za účelem posouzení rizik a změn, ke kterým došlo

- Rekvalifikace může být nutná v následujících případech:
• Zavedení nových dezinfekčních prostředků
• Změna počtu mikroorganismů v prostředí a/nebo izolace odolných organismů (např. B. cereus)
• Zavedení nových povrchů
• Došlo ke změnám kritických parametrů použití dezinfekčních prostředků

In vitro - test

Nejčastější příčiny nesplnění testů:

Obecné:

- Testování biozidů proti nesprávným mikroorganismům
- Použití nevhodných metod
- Nedostatečné plánování
- Nedostatečná doba kontaktu

Neutralizace:

- Nevhodná neutralizace
- Toxičnost neutralizátoru

Inokulum:

- Nízká životaschopnost inokulačních suspenzí
- Chybně připravené sporensuspenze bakteriálních spor a mycelií
- Použití hyf nebo mycelií může zabránit kontaktu biozidu se spory a jejich průniku

Povrchy:

- Porézní povrchy
- Testovací vzorky nejsou přístupné parní sterilizaci
- Nerovnoměrná inokulace nebo pokrytí produktu v důsledku vlnění nebo povrchového napětí

Opětovné nalezení:

- Odumírání po vyschnutí (např. P. aeruginosa)
- Nastavení uměle vysokých cílů logaritmické redukce
- Konečné desky nejsou zpracovatelné
- Metoda opětovného nalezení není validována

Důležité úvahy k prevenci nesplnění testů

Obecné

- Číst etikety produktů, aby bylo jasné, jaké jsou požadavky a omezení jednotlivých produktů (např. požadavky na účinnost a doby kontaktu).

- Používat správný typ chemikálie pro cílové organismy (např. nepoužívat 70% IPA nebo kationtové surfaktanty proti endospórám bakterií).

- Metody AOAC nejsou pro tyto testy vhodné (některé postupy, jako příprava inokula a sporensuspenzí, však mohou být užitečné).

- Metody ASTM E2197 a EN-13697 poskytují cenné poznatky o kvantitativních testech povrchů.

- Fyzické odstranění a chemické odstraňování by neměly být kombinovány v jedné studii.

- Do studie je třeba zahrnout datum expirace stanovené v interních standardních postupech.

- Konzistence je nezbytná pro výsledek.

- Předběžné plánování je velmi důležité a může být nutné provést několik experimentálních testů.

Neutralizace

- Metoda neutralizace musí být validována.

- Musí být testována účinnost a toxicita neutralizátoru.

- Před zahájením studie může být nutné provést několik pokusů a experimentů.

- Neexistuje univerzální neutralizátor pro všechny dezinfekční prostředky.

Inokulum

- Připravovat bakteriální suspenze z 18-24hodinových kultur a ihned s nimi inokulovat povrchy; nepoužívat je po několik dní.

- Používat sporensuspenze s hubami/myceliemi, které mohou zabránit kontaktu biozidu se spory a jejich průniku.

- Připravovat bakteriální sporensuspenze podle doporučené metody, například AOAC; ≥90% spor

Povrchy

- Menší testovací vzorky (1–2 cm) lze snadněji zpracovat a neutralizovat.

- Zbytky odstranit 70% IPA.

- Používat alternativní sterilizační metody (např. VHP®, suché teplo), pokud nelze povrchy autoklávovat.

Opětovné nalezení

- Metoda opětovného nalezení musí být validována.

- Ultrazvuk může pomoci s opětovným nalezením.

- Inokulované testovací vzorky nechat co nejkratší dobu schnout a ihned testovat.

- Metodu opětovného nalezení je třeba posoudit před zahájením formálních testů v experimentálních studiích.

Závěrečná poznámka

Kvalifikace dezinfekčních prostředků je klíčovým krokem při validaci dezinfekčního procesu používaného v sterilním výrobním prostředí. Bez ohledu na to, zda je in vitro test prováděn interně nebo v kontraktační laboratoři, je vždy nutné pečlivé plánování, důsledná pozornost k detailům a velká obezřetnost, aby bylo možné dosáhnout pozitivního výsledku, a tím předejít řadě problémů a potíží, které tyto studie přinášejí.

Seznam literatury

1. USP 37 Ch Disinfectants and Antiseptics.
2. FDA Guidance for Industry, Sterile Drug Products Produced by Aseptic Manufacturing – Current Good Manufacturing Practice. Sep. 2004. S. 34.