Surveillance microbiologique de l'hygiène dans la salle blanche et l'isolateur

Salles blanches et isolateurs jouent un rôle de plus en plus important dans l'industrie. Dans de nombreux secteurs et établissements, une grande quantité de produits est désormais fabriquée dans des salles blanches ou des isolateurs. Les avantages ainsi obtenus pour une meilleure qualité des produits sont évidents. Parallèlement, ces mesures permettent également d'améliorer la protection du personnel. Afin de garantir le respect strict des objectifs d'hygiène, la surveillance microbiologique de l'air et des surfaces doit également être contrôlée de manière rigoureuse.

Secteurs et établissements où les salles blanches et isolateurs sont utilisés :
- Industrie pharmaceutique
- Industrie alimentaire
- Industrie cosmétique
- Instituts de recherche
- Hôpitaux (bloc opératoire, unité de soins intensifs)

Contrôle microbiologique de la qualité de l'air

En plus des différentes exigences réglementaires et des normes correspondantes, qui imposent une vérification de la qualité de l'air (EU-GMP, ISO, USP, FDA), il devrait naturellement être dans l'intérêt de chaque responsable d'exploitation de disposer d'informations actualisées sur l'état de l'hygiène de l'air.

Dans la VDI 6022 (Exigences hygiéniques pour les installations de traitement de l'air dans les locaux de production, bureaux et salles de réunion), il est par exemple indiqué qu'une bonne qualité de l'air contribue non seulement au bien-être général des employés, mais influence également de manière décisive la qualité des produits en production.

Pour vérifier la concentration de micro-organismes dans l'air, des appareils spéciaux ont été développés, permettant, grâce à leur conception particulière, de collecter des particules jusqu’à ≤1 mm. La méthode de collecte des germes de l'air qui s’est imposée est le principe de l’Andersen Air Sampler. L’air aspiré entraîne les particules qu’il contient, avec une vitesse croissante, sur 6 plaques d’agar superposées, qui servent également de milieu nutritif. Les particules et les germes qui y adhèrent sont ainsi déposés selon leur taille sur la surface prévue à cet effet.

Trois de ces appareils de collecte de germes de l'air sont décrits ci-après.

Appareil de collecte de germes de l'air pour une utilisation mobile

Le MAS-100 NTÔ est un appareil mobile de collecte de germes de l'air doté d’un boîtier en aluminium anodisé robuste, basé sur le principe d’impact du Andersen Air Sampler. L’air est aspiré par un couvercle perforé (couvercle à trous) pouvant être stérilisé à l’autoclave. Le flux d’air accéléré, contenant particules et germes, est dirigé vers la surface d’une plaque d’agar. Après l’échantillonnage, le milieu nutritif est inoculé, les colonies comptées, et le nombre total de germes (NTG) évalué. Grâce à cette méthode directe, aucune manipulation de filtre n’est nécessaire, ce qui simplifie la collecte et élimine pratiquement tout risque de contamination secondaire.

Le MAS-100 NTÔ fonctionne avec une pompe à haut débit, mesurant en continu le volume grâce à un capteur de débit massique intégré. Un débit constant de 100 litres/min est ainsi assuré. Si le flux d’air est inégal en raison d’influences extérieures ou si les plaques de Petri sont surchargées, le volume d’air est automatiquement régulé. Pour la collecte de germes dans le secteur pharmaceutique, un volume maximal de 1 000 litres est recommandé conformément aux réglementations en vigueur.

En plus de la méthode standard décrite, le MAS-100 NTÔ permet également une collecte séquentielle d’échantillons d’air (SQS). Par exemple, 1 000 litres d’air peuvent être dirigés sur un milieu nutritif sur plusieurs heures, avec ou sans interruptions. Outre une plaque standard de 90 mm, il est également possible d’utiliser une plaque de contact.

Le MAS-100 NTÔ dispose d’un grand écran lumineux permettant de régler cinq volumes différents et une temporisation de démarrage automatique. Pendant la collecte, le volume recueilli et le temps restant sont affichés en permanence. Les paramètres actuels (volume, date, heure, utilisateur) sont enregistrés dans une liste d’échantillons accessible via l’écran ou un PC. En cas d’erreur lors de la collecte, celle-ci est consignée dans une liste d’alarmes et consultable comme indiqué précédemment. Un rappel de calibration précis à la journée affiché sur l’écran empêche tout dépassement de délai. Les appareils sont recalibrés et certifiés à nouveau sur site par un service utilisant une fonction de calibration automatique garantissant un résultat précis et reproductible, indépendant de l’opérateur.

Le MAS-100 NTÔ est équipé d’une batterie lithium-ion rechargeable d’une capacité de 50 000 litres, offrant une autonomie de 7 à 8 heures. En cas de besoin, l’appareil peut également fonctionner sur secteur. Pour la collecte de germes dans des zones à risque d’explosion, un appareil séparé, le MAS-100 NT® Ex, est disponible.

Les appareils sont parfaitement adaptés pour une utilisation sous flux laminaire, car la vitesse d’aspiration d’air au-dessus du couvercle perforé est de 0,45 m/sec, évitant ainsi tout stagnation d’air. Après passage à travers le couvercle (trous de 300 x 0,6 mm), la vitesse d’impact des particules et micro-organismes sur la surface d’agar dans l’air accéléré est inférieure à 20 m/sec, atteignant ainsi au moins le niveau 5 du principe d’Andersen. Avec cette vitesse, il est garanti que les particules ≥ 1 µm sont retenues sur la plaque d’agar.

Tous les appareils MAS-100Ô respectent les directives ISO 14689 partie I et II, ainsi que GAMP 4.0, et sont entièrement validés.

Il est possible, avec le nouveau logiciel de communication et de calibration du MAS-100 NTÔ, de définir jusqu’à 10 noms d’utilisateurs. Ce mode de fonctionnement garantit une documentation automatique et sans erreur de toutes les collectes, et permet de transférer les 100 dernières données enregistrées dans l’appareil vers un PC. L’analyse des plaques de Petri est ensuite enregistrée dans la colonne correspondante des protocoles. La table de conversion intégrée (Feller) ajuste automatiquement le nombre de colonies par m3 d’air réel.

Système stationnaire de collecte de germes de l'air comme solution pour salle blanche et isolateur

De plus en plus, les processus de fabrication dans le secteur pharmaceutique, cosmétique ou alimentaire doivent se dérouler dans des conditions d’hygiène particulièrement strictes. Les raisons en sont notamment les exigences accrues en matière de qualité des produits, selon des réglementations telles que GMP, HACCP, DIN ISO, ou encore l’interdiction d’utiliser des conservateurs.

Le système MAS-100 ISO NT® est une version conçue pour une installation fixe dans des salles blanches et des isolateurs, dérivée du collecteur de germes d’air mobile MAS-100 NT®, et possède également les spécifications techniques décrites précédemment :
- Débit d’air 100 litres/min
- Fonctionnement avec plaque de Petri de 90 mm
- Capteur de débit massique intégré
- Prélèvements fractionnés sur une période déterminée
- Cinq volumes réglables individuellement

Pour éviter autant que possible l’introduction de matériaux dans les salles blanches et isolateurs, tels que composants électroniques ou mécaniques, ventilateurs, etc., un concept a été développé : la tête de prélèvement, généralement en acier inoxydable, est fixée en un endroit précis dans la salle blanche ou l’isolateur. L’électronique, ainsi que les composants mécaniques du système MAS-100 ISO NT®, sont installés à l’extérieur de la zone critique, reliés à la tête de prélèvement par un tube en acier inoxydable ou un flexible résistant au H2O2. Cela élimine la nécessité de longues lignes d’aspiration menant à une pompe centrale.

Une unité de double vanne spéciale et une pompe séparée permettent d’intégrer la tête de prélèvement et la conduite d’aspiration dans le processus de stérilisation de l’isolateur, sans manipulation supplémentaire. La commande automatique des vannes empêche également l’entrée d’air extérieur en cas de chute de pression à l’intérieur de la zone.

Le fonctionnement et la sélection des paramètres pertinents se font via un écran intégré. La collecte peut être démarrée par un bouton de déclenchement direct après avoir inséré la plaque d’agar dans la tête de prélèvement. Des interfaces et modules tels que USB, RS232/485, Profibus et Ethernet offrent d’autres possibilités de contrôle, de démarrage et de communication des données.

Le système MAS-100 ISO NT® est également proposé en version RABS sans cycle de stérilisation, avec la même fonctionnalité.

Une logiciel spécifique de communication et de calibration accompagne le système MAS-100 ISO NT®, offrant jusqu’à cinq niveaux d’accès et la programmation individuelle du système (Windows 95 et supérieur). Jusqu’à 100 journaux d’échantillons et d’alarmes peuvent être enregistrés, et jusqu’à neuf systèmes MAS-100 ISO NT® peuvent être connectés à un PC. Cela permet au microbiologiste responsable de garder une vue d’ensemble sur toutes les collectes de germes de l’air effectuées.

Le système MAS-100 ISO NT® est entièrement validé.

Prélèvement microbiologique de gaz sous pression

Conformément à EN ISO 14698-1, les gaz comprimés doivent être vérifiés régulièrement pour la présence de micro-organismes. Dans un environnement de travail normal ou stérile, l’utilisation d’appareils de collecte de germes d’air est désormais standard. Cependant, les gaz comprimés sont souvent examinés pour les germes à l’aide d’équipements improvisés insuffisants ou pas du tout, en raison de problèmes physiques.

Les éléments remarquables, tels que l’utilisation du principe d’impact (impaction) avec des plaques de Petri standard de 90 mm, ainsi que la simplicité d’utilisation et le processus entièrement automatique de collecte sous pression, font du MAS-100 CGÔ une solution pratique pour cette application.

La collecte sous pression empêche la destruction des micro-organismes par une détente soudaine de la pression du gaz. De plus, aucune mesure supplémentaire de pression ou de temps n’est nécessaire.

Le MAS-100 CGÔ fonctionne avec deux capteurs qui mesurent en permanence la masse et la pression du gaz, maintenant un débit constant de 50 ou 100 litres/min, avec une pression de gaz possible comprise entre 1,5 et 10 bar. Ensuite, le gaz est lentement décompressé.

Les principaux gaz de pression couramment utilisés dans l’industrie, tels que l’air, le dioxyde de carbone, l’azote, l’oxygène et l’argon, sont préprogrammés. Cinq autres types de gaz peuvent être déterminés par l’utilisateur et programmés en usine dans le MAS-100 CGÔ.

Le fonctionnement sur batterie rend le MAS-100 CGÔ indépendant de toute source d’alimentation électrique. De plus, son utilisation dans des zones à risque d’explosion ne pose aucun problème grâce à sa protection intrinsèque.

La tête de prélèvement spéciale est testée sous pression et peut être autoclave avec le flexible d’alimentation en gaz (flexible métallique).

Le MAS-100 CGÔ Ex répond à des exigences importantes pour assurer la sécurité de l’utilisateur et la fiabilité des résultats :
- Soupape de surpression intégrée > 10 bar
- Affichage de pression indépendant
- LED clignotante en cas de mise sous pression
- Appareil antidéflagrant
- Décompression lente automatique du gaz
- Affichage de faible débit d’air
- Appareil calibrable

Contrôles hygiéniques microbiologiques des surfaces

En plus de la surveillance de l’air, le contrôle microbiologique des surfaces est également requis par les réglementations nationales et internationales (EU-GMP, USP, ISO, FDA). Les points critiques (CCP) dans le cadre du concept HACCP, les surfaces dans la zone de production (GMP) ou dans les zones de protection (unités de soins intensifs, salles d’opération) doivent être inclus dans la vérification.

- Surfaces en contact avec le produit
- Sols
- Murs
- Poignées de porte
- Personnel
- Textiles
- Gants

Pour cela, la méthode la plus couramment utilisée est la pose de plaques de contact. Ces plaques de Petri de 55 mm (25 cm² de surface) sont remplies d’un milieu nutritif convexe, qui est pressé contre la surface à vérifier après un délai déterminé (5-10 secondes). Ensuite, la plaque est refermée avec le couvercle et incubée. La collecte est principalement recommandée pour déterminer le nombre total de germes (NTG) avec un agar au caséine-soja (Casein-Sojamehl-Pepton-Agar). Pour détecter par exemple des levures et des moisissures, des milieux nutritifs spécialement composés peuvent également être utilisés.

Les plaques de contact utilisées doivent être emballées par double ou triple, irradiées au gamma, et stockées à température ambiante pendant plusieurs semaines. Étant donné que l’on doit souvent faire face à des résidus de désinfectant sur les surfaces, des inhibiteurs sont ajoutés aux milieux nutritifs pour leur inactivation. La combinaison de Tween, de la lécithine, de l’hystidine et du thiosulfate de sodium s’est avérée efficace.

Les instructions des fabricants de milieux nutritifs doivent être respectées. Les bactéries environnementales sont incubées pendant 24 à 68 heures à 30°C, et les levures et moisissures pendant au moins 7 jours à 25°C. Le résultat est extrapolé à 100 cm² de surface.

(Conférence d’Eckart Baumgärtner, VWR International Darmstadt, présentée lors de la Reinraum Lounge 2010 à Karlsruhe) Contact : VWR International email : mibio@de.vwr.com ou par téléphone au 06151-3972-406