Monitoreo microbiológico de la higiene en salas limpias y en aisladores

Las salas limpias y los aisladores desempeñan un papel cada vez más importante en la industria. En muchos sectores e instalaciones, una gran cantidad de productos se fabrican actualmente en salas limpias o aisladores. Las ventajas que esto conlleva para una mejor calidad del producto son evidentes. Al mismo tiempo, con estas medidas también se logra una mejor protección del personal. Para cumplir estrictamente con los objetivos de higiene, también debe controlarse rigurosamente la monitorización microbiológica del aire y de las superficies.

Industrias e instalaciones en las que se utilizan salas limpias y aisladores:
- Industria farmacéutica
- Industria alimentaria
- Industria cosmética
- Institutos de investigación
- Hospitales (quirófanos, unidades de cuidados intensivos)

Control microbiológico de la calidad del aire

Además de las diferentes regulaciones gubernamentales y las normas correspondientes que exigen la comprobación de la calidad del aire (EU-GMP, ISO, USP, FDA), por supuesto, es en interés de cada director de operaciones tener información actualizada sobre el estado de la higiene del aire.

En la VDI 6022 (Requisitos higiénicos para instalaciones de aire acondicionado en espacios de producción, oficinas y reuniones), se señala, por ejemplo, que una buena calidad del aire no solo contribuye al bienestar general de los empleados, sino que también influye decisivamente en la calidad de los productos en la planta.

Para verificar la concentración de microorganismos en el aire, se han desarrollado dispositivos especiales que, por su construcción particular, permiten recoger partículas de hasta ≥1mm. Como método para la recolección de microorganismos en el aire, se ha establecido el principio del Andersen Air Sampler. En este proceso, el aire aspirado arrastra las partículas contenidas en él con una velocidad creciente sobre 6 placas de agar apiladas, que también sirven como medio de cultivo. Las partículas y los gérmenes que llevan adheridos se depositan en diferentes niveles según su tamaño.

Se describen a continuación tres de estos dispositivos de muestreo de microorganismos en el aire.

Aspirador de microorganismos en el aire para uso móvil

El MAS-100 NT® es un dispositivo móvil de muestreo de microorganismos en el aire con una carcasa de aluminio anodizado resistente, que se basa en el principio de impacto del Andersen Air Sampler. El aire es aspirado a través de una tapa perforada (tapa con agujeros) que puede ser autoclaveada. La corriente de aire acelerada, que contiene partículas y gérmenes, se dirige hacia la superficie de una placa de agar. Tras la toma de muestra, se inocula el medio de cultivo, se cuentan las colonias y se evalúa como número total de microorganismos (NTM). Debido a que este método directo no requiere manipulación de filtros, la toma de muestras se simplifica y se evita prácticamente la contaminación secundaria.

El MAS-100 NT® funciona con un ventilador de alto rendimiento que mide continuamente el volumen mediante un sensor de flujo de masa integrado. Esto garantiza un caudal de aire constante de 100 litros/minuto. Si el flujo de aire se interrumpe o reduce por influencias externas o por placas de Petri sobrecargadas, la cantidad de aire se regula automáticamente. Para la medición de microorganismos en el aire, en áreas farmacéuticas, por ejemplo, se recomienda un volumen de muestreo máximo de 1.000 litros según las regulaciones correspondientes.

Además del método estándar descrito, el MAS-100 NT® permite también una toma de muestras secuencial (SQS). Por ejemplo, se pueden dirigir 1.000 litros de aire durante varias horas, con interrupciones opcionales, sobre un medio de cultivo. Además de la placa de Petri estándar de 90 mm, también es posible usar una placa de contacto.

El MAS-100 NT® cuenta con una pantalla grande iluminada donde se pueden ajustar cinco volúmenes diferentes y un retardo de inicio automático. Durante la toma de muestras, se muestran continuamente el volumen recogido y el tiempo restante. La configuración actual (volumen, fecha, hora, usuario) se guarda en una lista de muestras en el dispositivo y puede visualizarse en la pantalla o en un PC. Si ocurre un error durante la toma de muestras, se registra en una lista de alarmas y puede consultarse como se describió anteriormente. Un recordatorio de calibración exacto en la pantalla evita que se sobrepase el plazo de calibración. Los dispositivos son recalibrados y certificados nuevamente en el lugar mediante una función automática de calibración, que garantiza resultados precisos y reproducibles sin intervención humana.

El MAS-100 NT® está equipado con una batería de iones de litio recargable con una capacidad de 50.000 litros, que proporciona una autonomía de 7-8 horas. En caso necesario, también puede funcionar conectado a la red eléctrica. Para la toma de muestras microbiológicas en zonas explosivas, existe un modelo separado, el MAS-100 NT® Ex, a prueba de explosiones.

Estos dispositivos son ideales para su uso en flujos laminares, ya que la velocidad de aspiración del aire sobre la tapa perforada es de 0,45 m/seg, evitando así acumulaciones de aire. Tras atravesar la tapa (agujeros de 0,6 mm de diámetro, 300 en total), la velocidad de impacto de partículas y microorganismos en la superficie del agar en el aire acelerado es <20 m/seg. Esto garantiza al menos el nivel 5 del Andersen Air Sampler. Con esta velocidad del aire, se asegura que partículas ≥1 µm queden retenidas en la placa de agar.

Todos los dispositivos MAS-100® cumplen con las directrices de la ISO 14689 Parte I y Parte II y GAMP 4.0, y están completamente validados.

Es posible definir hasta 10 nombres de usuario (usuarios) con el nuevo software de comunicación y calibración del MAS-100 NT®. Este modo de operación garantiza una documentación automática y sin errores de todas las tomas de muestras y puede transferir los últimos 100 datos almacenados en el dispositivo a un PC. La evaluación de las placas de Petri se registra en la columna correspondiente de los protocolos. La tabla de conversión integrada (Feller) corrige automáticamente el recuento real de colonias por m3 de aire.

Sistema estacionario de muestreo de microorganismos en el aire como solución para salas limpias y aisladores

Cada vez más procesos de fabricación en la industria farmacéutica, cosmética y también en la alimentaria deben realizarse en condiciones higiénicas especialmente estrictas. Las razones incluyen mayores exigencias sobre los productos debido a normativas de calidad como GMP, HACCP, DIN ISO, etc., o, por ejemplo, la prohibición de conservantes.

El sistema MAS-100 ISO NT® es una versión diseñada para instalación fija en salas limpias y aisladores del muestreador de microorganismos en el aire móvil MAS-100 NT®, y también posee las especificaciones técnicas previamente descritas:
- Caudal de aire 100 litros/min
- Operación con placa de Petri de 90 mm
- Sensor de flujo de masa integrado
- Muestreo fraccionado durante un período determinado
- Cinco volúmenes ajustables individualmente

Para evitar en la medida de lo posible la introducción de materiales en salas limpias y aisladores, como unidades electrónicas o mecánicas, ventiladores, etc., se ha desarrollado un concepto en el que la cabeza de muestreo, generalmente fabricada en acero inoxidable, se instala en un lugar fijo dentro de la sala limpia o aislador. La electrónica, conectada individualmente a cada cabeza de muestreo mediante un tubo de acero inoxidable o una manguera resistente al H2O2, y los componentes mecánicos del sistema MAS-100 ISO NT® se montan fuera del área crítica. Esto elimina la necesidad de instalar largas líneas de aspiración hacia una bomba de vacío central.

Una unidad de doble válvula especial y una bomba separada permiten integrar la cabeza de muestreo y la línea de aspiración en el proceso de esterilización del aislador sin manipulaciones adicionales. La regulación automática de las válvulas también evita que, en caso de caída de presión interna, entre aire del exterior.

El manejo y la selección de parámetros relevantes se realiza a través de una pantalla incorporada. La toma de muestras puede iniciarse con un botón de disparo directo tras colocar la placa de agar en la cabeza de muestreo. También existen interfaces y módulos como USB, RS232/485, Profibus y Ethernet para control, inicio y comunicación de datos.

El sistema MAS-100 ISO NT® también se ofrece en versión RABS sin ciclo de esterilización, con la misma funcionalidad.

Se suministra un software especial de comunicación y calibración para el MAS-100 ISO NT®, que ofrece hasta cinco niveles de acceso y la programación individual del sistema (Windows 95 y superior). Se pueden guardar 100 registros de muestras y alarmas, y conectar hasta nueve sistemas MAS-100 ISO NT® a un PC. Esto permite al microbiólogo responsable tener siempre una visión general de las determinaciones de muestreo de microorganismos en el aire realizadas.

El sistema MAS-100 ISO NT® está completamente validado.

Muestreo microbiológico de gases a presión

Según EN ISO 14698-1, los gases comprimidos deben comprobarse rutinariamente en busca de microorganismos. En entornos de trabajo normales o estériles, el uso de dispositivos de muestreo de microorganismos en el aire ya es estándar. Sin embargo, los gases comprimidos, debido a problemas físicos, a menudo se analizan con equipos improvisados insuficientes o no se analizan en absoluto en busca de gérmenes.

Las excelentes características, como el uso del principio de impacto (impactación) con placas de Petri estándar de 90 mm y la sencilla manipulación, junto con el proceso completamente automático de muestreo bajo presión, hacen del MAS-100 CG® Ex una solución cómoda para esta aplicación.

El muestreo bajo presión evita que los microorganismos se destruyan por una rápida descompresión del gas. Además, no es necesario realizar mediciones adicionales de tiempo y presión.

El MAS-100 CG® Ex funciona con dos sensores que miden continuamente la masa y la presión del gas, manteniendo un flujo constante de 50 o 100 litros/minuto en un rango de presión de gas de 1,5 a 10 bar. Luego, se realiza una descompresión lenta del gas.

Los factores de los gases de presión más utilizados en la industria, como aire, dióxido de carbono, nitrógeno, oxígeno y argón, están preprogramados para su selección. Otros cinco tipos de gases pueden ser definidos por el usuario y programados en la memoria de fábrica del MAS-100 CG® Ex.

El funcionamiento con batería hace que el uso del MAS-100 CG® Ex sea independiente de las fuentes de energía. Además, su uso en zonas explosivas no presenta problema alguno debido a la protección Ex.

La cabeza de muestreo especial ha sido sometida a pruebas de presión y puede autoclavearse junto con la manguera de suministro de gas (flexible metálica).

El MAS-100 CG® Ex cumple con requisitos importantes para garantizar la seguridad del usuario y la fiabilidad de los resultados:
- Válvula de sobrepresión incorporada > 10 bar
- Indicador de presión independiente
- LED parpadeante cuando el dispositivo está bajo presión
- Dispositivo a prueba de explosiones
- Descompresión automática lenta del gas
- Indicador de bajo flujo de aire
- Dispositivo calibrable

Controles higiénicos microbiológicos de superficies

Además del monitoreo del aire, el control microbiológico de superficies también está regulado por normativas nacionales e internacionales (EU-GMP, USP, ISO, FDA). La inspección debe incluir, por ejemplo, puntos críticos de control (PCC) en el marco del concepto HACCP, superficies en áreas de producción (GMP) o en zonas de protección (unidad de cuidados intensivos, quirófanos).

- Superficies en contacto con productos
- Suelos
- Paredes
- Manijas de puertas
- Personal
- Textiles
- Guantes

Para ello, la técnica preferida son las llamadas placas de contacto. Estas placas de Petri de 55 mm (con una superficie de 25 cm2) contienen un medio de cultivo en forma convexa, que se presiona contra la superficie a examinar tras un período establecido (5-10 segundos). Luego, la placa se vuelve a cerrar con la tapa y se incuba. La toma de muestras se recomienda principalmente para determinar el recuento total de microorganismos (RTM) con agar de caseína-soja (Casein-Sojamehl-Pepton-Agar). Para detectar, por ejemplo, levaduras y mohos, también se pueden usar medios de cultivo especialmente formulados.

Las placas de contacto utilizadas deben estar empaquetadas doble o triple, esterilizadas con gamma y ser estables a temperatura ambiente durante varias semanas. Dado que en superficies a menudo se encuentran residuos de desinfectantes, se añaden inhibidores en los medios de cultivo para inactivarlos. La combinación de Tween, lecithina, histidina y tiosulfato de sodio ha demostrado ser efectiva.

Se deben seguir las instrucciones de los fabricantes de medios de cultivo. Las bacterias ambientales se incuban durante 24 a 68 horas a 30°C, y las levaduras y mohos al menos 7 días a 25°C. Como resultado, las colonias seleccionadas se extrapolan a 100 cm2.

(Ponencia de Eckart Baumgärtner, VWR International Darmstadt, presentada en la Reinraum Lounge 2010 en Karlsruhe) Contacto: VWR International email: mibio@de.vwr.com o por teléfono al 06151-3972-406